诊断
1.病史 凡有以下危险因素均要考虑细菌感染的可能：①羊膜早破大于12～24h;②母孕后期有发热和绒毛膜炎病史；③出生时Apgar评分低并有抢救史；④早产、双胎。
院内感染易发生于下列情况：①新生儿监护病区（NICU）治疗的患儿；②有入侵式治疗的患儿如气管插管、脐静脉插管等；③住院天数长；④接受手术治疗的患儿；⑤病房拥挤；⑥长期应用广谱抗生素治疗等。
2.临床表现 新生儿常表现为非特异性的症状。
（1）呼吸窘迫 为最常见，在败血症婴儿中占90%，严重程度可有不同：如轻微的呼吸急促，鼻掮呼吸三凹征、对氧的需要增加，呼吸暂停、呼吸困难、甚至出现呼吸衰竭需要人工通气。
（2）心率增快和周围循环灌注差，青紫。
（3）低血压。
（4）酸中毒（代谢性），低血糖或高血糖。
（5）体温不稳定：10%～30%的新生儿可有发热和体温不升。
（6）胃肠道症状：包括呕吐、腹泻、腹胀、纳差。
（7）活动减弱或嗜睡、烦躁不安、呻吟。
（8）抽痉。
（9）瘀斑或瘀点。
（10）其他如黄疸、肝脾肿大等。
3.实验室检查
（1）外周血白细胞计数和分类 血白细胞计数<5×109/L，未成熟白细胞和中性粒细胞比例>0.2提示有细菌感染。
（2）血小板计数 血小板计数<100×109/L提示新生儿败血症的可能。
（3）急相蛋白 ①C-反应蛋白>15μg/ml提示有细菌感染，②ESR>15mm/h。
（4）血培养检查 血培养阳性可确立病因诊断，疑有感染的患儿均需在入院后用抗菌素前取周围血做培养，并应严格遵守无菌操作，防止污染。如患儿用过作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素，可用高渗培养基作L型细菌培养，怀疑有厌氧菌感染时，可作厌氧菌培养。
（5）其他部位培养 脐部、尿液、大便或其他局部感染灶的培养。
（6）放射学的检查 胸部X线检查在有呼吸系统症状的患儿均应进行。
（7）病原菌抗原检测 如对流免疫电泳、乳胶凝集试验，血凝抑制试验等方法。
鉴别
1.颅内出血、窒息 败血症有呼吸暂停、震颤、抽搐、前囟凸出、表示有神经系统侵犯时，尤其是初生1周内患儿，应与颅内出血、窒息等鉴别。后者发病早，多在生后1、2天内起病，有产伤史。有神经系统先天畸形并发脑膜炎时，也应与败血症鉴别。
2.呼吸道疾病 败血症早期症状可有呼吸困难、急促、发绀等，应与气胸、肺炎、未成熟儿原发性呼吸窘迫综合征、肺膨胀不全等鉴别，必要时可摄胸部X线片以协助诊断。
3.消化道疾病 腹胀、呕吐、大便次数多或减少，是肠道原发病的表现，也可在败血症时出现，应分析各症状的发展和因果关系。对肠菌类引起的败血症应提高警惕。
4.血液病 新生儿溶血病、红细胞酶的缺乏也可表现黄疸、贫血、呼吸急促和呼吸困难等，但严重的溶血性贫血并无感染征，可与败血症引起的高胆红素血症鉴别。新生儿出血症须与败血症并发出血者鉴别，前者无感染灶，输血和维生素K治疗可获痊愈。特发性血小板减少性紫癜和先天性白血病应与败血症鉴别，可由血常规检查协助诊断。
5.新生儿肝炎 以黄疸为首发症状，皮肤黄染明显而全身感染、中毒症状轻，故常常误诊。新生儿败血症出现黄疸的机制除细菌毒素引起的溶血外，与肝细胞的损伤、肝脏排泄胆汁障碍及新生儿肝脏酶系统发育不完善，胆红素在肝脏结合过程受到抑制有关。所以部分患儿血中转氨酶及直接胆红素升高，临床常误诊为肝炎综合征而延误治疗。
患儿无肝炎接触史，与其母HBsAg全部阴性。实验室检测，多数患儿白细胞数增高，选用抗生素治疗症状迅速好转。同时有局部感染灶更是诊断败血症的重要线索。而没有明显感染灶的新生儿败血症惟一依据是血培养。因此当患儿出现原因不明的黄疸时，应想到败血症的可能并早期采血做细菌培养。如果一次血培养阴性而又高度怀疑败血症时，应反复做血或感染灶的渗出物的细菌培养以提高阳性率。
6.其他感染 单纯疱疹、巨细胞包涵体病、柯萨奇病毒感染等均可在新生儿期发生，其症状与败血症相似。单纯疮疹病毒感染，半数可无疱疹，只有全身症状。柯萨奇病毒可引起发热、厌食、呕吐、苍白、发绀、呼吸困难、肝大、黄疸、出血等，主要表现为心肌炎和脑膜炎，多在初生2周内发病。另外，弓形虫病、球状孢子菌病、播散性组织胞浆菌病等少见病，有时也应与败血症鉴别。